Reactivo ELISA para HAV IgM

INFORMACIÓN GENERAL

RESUMEN Y EXPLICACIÓN

La hepatitis A es una enfermedad autolimitada y la fase crónica u otras complicaciones son poco frecuentes.

Las infecciones se producen en etapas tempranas de la vida en áreas donde el saneamiento es deficiente y las condiciones de vida son de hacinamiento. Con un mejor saneamiento e higiene, las infecciones se retrasan y, en consecuencia, aumenta el

número de personas susceptibles a la enfermedad. Debido a que la enfermedad se transmite

por vía fecal-oral en regiones densamente pobladas, un brote puede surgir de una sola

fuente contaminada. La causa de la hepatitis A es el virus de la hepatitis A (VHA), un virus ARN de cadena positiva sin envoltura con un genoma monocatenario lineal, que codifica solo un serotipo conocido. El VHA tiene cuatro polipéptidos estructurales principales y se localiza exclusivamente en el

citoplasma de los hepatocitos humanos. La infección con VHA induce una fuerte respuesta inmunológica y se detectan niveles elevados primero de IgM y luego de IgG a los pocos días de la aparición de los síntomas. La presencia de IgM anti-VHA es un marcador serológico importante

para la detección temprana y la observación de la manifestación clínica de la enfermedad. Los niveles crecientes de IgM anti-VHA son detectables aproximadamente tres semanas después de la exposición, con el título más alto

después de cuatro a seis semanas más tarde. Dentro de los seis meses posteriores a la infección, la concentración de IgM disminuye a

niveles no detectables.

PRUEBA PRINCIPAL

Este kit es un ensayo ELISA de captura de anticuerpos en fase sólida, de incubación en dos pasos, en el que las tiras de micropocillos de poliestireno

se recubren previamente con anticuerpos dirigidos a las proteínas M de inmunoglobulina humana (anti-cadena μ). Se agrega la muestra de suero/plasma del paciente y durante la primera

incubación, cualquier anticuerpo IgM se capturará en los pocillos. Después de lavar todos los demás

componentes de la muestra y, en particular, los anticuerpos IgG, la IgM específica del VHA capturada en

la fase sólida se detecta mediante la adición de antígenos del VHA conjugados con peroxidasa de rábano picante (conjugado HRP). Durante la segunda incubación, los antígenos conjugados con HRP

reaccionarán específicamente solo con los anticuerpos IgM de VHA y, después de lavarlos para eliminar el conjugado de HRP no unido, se agregan soluciones de cromógeno a los pocillos.

En presencia del inmunocomplejo (anti-μ)-(IgM de VHA)-(antígeno-HRP), los cromógenos incoloros son hidrolizados por el conjugado de HRP unido a un producto de color azul. El color azul se vuelve amarillo después de detener la reacción con ácido sulfúrico. La intensidad del color se puede medir y es proporcional a la cantidad de anticuerpo capturado en los pocillos

y a la muestra, respectivamente. Los pocillos que contienen muestras negativas para IgM de VHA permanecen

incoloros.

COMPONENTES DEL KIT

PLACA DE MICROPOZOS

1 12×8 pocillos por placa. Tiras de micropocillos en blanco fijadas en

un soporte de tiras blanco. La placa está sellada en una bolsa de aluminio con

desecante. Cada pocillo contiene anticuerpos anti-IgM (cadenas anti-μ). Las tiras de micropocillos se pueden romper para usarlas

por separado. Coloque los pocillos o tiras sin usar en la bolsa de almacenamiento sellable de plástico junto con el desecante y vuelva a colocar a 2-8 °C.

CONTROL POSITIVO 1 0,5 mL por vial. Líquido de color rojo en un vial con tapa de

rosca roja. Anticuerpos anti-IgM anti-VHA purificados diluidos en un tampón estabilizado

con proteínas. Conservantes: 0,1 % ProClin300. Listo para usar tal como se suministra. Una vez abierto, estable durante un mes a 2-8 °C.

CONTROL NEGATIVO 1 0,5 mL por vial. Líquido amarillento en un vial con tapa de

rosca verde. Tampón estabilizado con proteínas probado como no reactivo para

IgM de VHA. Conservantes: 0,1 % ProClin300. Listo para usar tal como se suministra. Una vez abierto, estable durante un mes a 2-8 °C.

CONJUGADO ENZIMÁTICO 1 12 ml por vial. Líquido de color rojo en un vial blanco con tapa

de rosca roja. Antígenos de VHA conjugados con peroxidasa de rábano picante.

Listo para usar tal como se suministra. Una vez abierto, estable durante un mes a

2-8 °C.

SOLUCIÓN DE SUSTRATO A 1 7 ml por vial. Líquido incoloro en un vial blanco con tapa

de rosca verde. Solución de peróxido de urea. Listo para usar tal como se suministra.

Una vez abierto, estable durante un mes a 2-8 °C.

SOLUCIÓN DE SUSTRATO B 1 7 ml por vial. Líquido incoloro en un vial negro con tapa de

rosca negra. Solución de TMB (tetrametilbencidina disuelta en ácido cítrico). Listo para usar tal como se suministra. Una vez abierto, estable durante

un mes a 2-8 °C.

SOLUCIÓN DE PARADA 1 7 ml por vial. Líquido incoloro envasado en un vial blanco con

tapa de rosca blanca. Solución de ácido sulfúrico diluido (0,5 M H2SO4).

TAMPÓN DE LAVADO 1 50 ml por frasco. Líquido incoloro envasado en un frasco transparente con

tapa de rosca blanca, pH 7,4, 20x PBS (contiene Tween-20 como

detergente) DILUIR ANTES DE USAR: El concentrado debe

diluirse 1:20 con agua destilada/desionizada antes de su uso. Once

diluido, estable durante una semana a temperatura ambiente o durante dos

semanas a 2-8 °C.

PLACA DE CARTÓN

CUBIERTAS 2

BOLSA DE PLÁSTICO SELLABLE 1

PROSPECTO 1