Reactivo ELISA para HBsAb

INFORMACIÓN GENERAL

El virus de la hepatitis B (VHB) es un virus de ADN bicatenario con envoltura que pertenece a la familia

Hepadnaviridae y se reconoce como la principal causa de hepatitis de transmisión sanguínea

junto con el virus de la hepatitis C (VHC). La infección por VHB induce un espectro de manifestaciones clínicas que van desde una enfermedad leve e inaparente hasta hepatitis fulminante, enfermedades hepáticas crónicas graves, que en algunos casos pueden derivar en cirrosis y carcinoma de hígado. La clasificación de una

infección por hepatitis B requiere la identificación de varios marcadores serológicos expresados ​​durante

tres fases (incubación, aguda y convaleciente) de la infección. En la actualidad se utilizan varias pruebas diagnósticas para la detección, el diagnóstico clínico y el tratamiento de la enfermedad.

El antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), que aparece poco después de la infección, es una proteína importante

de la estructura de la envoltura del virus. El HBsAg es un marcador serológico clave para la detección y el diagnóstico del VHB y es detectable en la sangre durante la fase aguda de la enfermedad. El aclaramiento

después del tratamiento muestra recuperación, mientras que la presencia durante más de medio año después de la infección indica

posible progresión a la etapa de portador crónico prolongado. Durante la fase aguda de la infección, se desarrolla una fuerte

respuesta inmunológica y los títulos crecientes de anticuerpos neutralizantes de HBsAg (anti-HBs) son un marcador de recuperación. La detección serológica de anti-HBs se ha convertido en un método

importante para el seguimiento de pacientes infectados por el VHB, estudios prospectivos de prevalencia y el

monitoreo de los receptores tras la vacunación con vacunas sintéticas y naturales basadas en HBsAg.

PRINCIPIO DEL ENSAYO

Para la detección de anti-HBs, este kit utiliza el método ELISA de "sándwich" de antígeno donde las tiras de micropocillos de poliestireno

se recubren previamente con HBsAg recombinante. La muestra de suero o plasma del paciente se

agrega a los micropocillos junto con un segundo HBsAg conjugado con peroxidasa de rábano picante

(conjugado enzimático). En caso de presencia de anti-HBs en la muestra, los antígenos pre-recubiertos y

conjugados se unirán a los dos dominios variables del anticuerpo y durante

la incubación, el inmunocomplejo específico formado se captura en la fase sólida. Después de lavar para

eliminar las proteínas séricas de la muestra y los conjugados enzimáticos no unidos, se agregan soluciones de sustrato que contienen

tetrametilbencidina (TMB) y peróxido de urea a los pocillos. En presencia del

complejo "sándwich" antígeno-anticuerpo-antígeno (HRP), las soluciones de sustrato incoloras son

hidrolizadas por el conjugado enzimático unido a un producto de color azul. El color azul se vuelve amarillo

después de detener la reacción con ácido sulfúrico. La cantidad de intensidad de color se puede medir y es proporcional a la cantidad de anticuerpo capturado en los pocillos y a la muestra,

respectivamente. Los pocillos que contienen muestras negativas para anti-HBs permanecen incoloros.

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS

• Agua recién destilada o desionizada

• Guantes desechables y cronómetro

• Contenedores de desechos adecuados para materiales potencialmente contaminados

• Sistema de dispensación y/o pipeta

• Puntas de pipeta desechables

• Pañuelo absorbente o toalla limpia

• Incubadora seca o baño de agua, 37 ± 1 °C

• Lector de placas, longitud de onda única 450 nm o longitud de onda dual 450/600-650 nm

• Sistema de aspiración/lavado de micropocillos