Reactivo ELISA para TSH

INFORMACIÓN GENERAL

USO PREVISTO

La prueba ELISA de TSH está destinada a ser utilizada para la determinación cuantitativa de la hormona estimulante de la tiroides (TSH, tirotropina) en suero.

SIGNIFICADO DIAGNÓSTICO

La medición de la concentración sérica de tirotropina (TSH), una glucoproteína con un peso molecular de 28000 daltons y secretada por la hipófisis anterior, se considera generalmente como el indicador más sensible disponible para el diagnóstico de hipotiroidismo primario y secundario (hipofisario) (1, 2). El aumento de las concentraciones séricas de TSH, que es la principal responsable de la síntesis y liberación de hormonas tiroideas, es un indicador temprano y sensible de la disminución de la reserva tiroidea y, junto con la disminución de las concentraciones de tiroxina (T4), como diagnóstico de hipotiroidismo primario. El aumento esperado de las concentraciones de TSH demuestra el sistema clásico de retroalimentación negativa entre la hipófisis y la glándula tiroides. Es decir, la insuficiencia primaria de la glándula tiroides reduce la secreción de hormonas tiroideas, que a su vez estimulan la liberación de TSH de la hipófisis.

Además, las mediciones de TSH son igualmente útiles para diferenciar el hipotiroidismo secundario y terciario (hipotalámico) de la enfermedad tiroidea primaria. La liberación de TSH de la hipófisis está regulada por el factor liberador de tirotropina (TRH), que es secretado por el hipotálamo, y por la acción directa de T4 y triyodotironina (T3), las hormonas tiroideas, en la hipófisis. El aumento de los niveles de T3 y T4 reduce la respuesta de la hipófisis a los efectos estimulantes de la TRH. En el hipotiroidismo secundario y terciario, las concentraciones de T4 suelen ser bajas y los niveles de TSH son generalmente bajos o normales. Esto se debe a una deficiencia de TSH hipofisaria (hipotiroidismo secundario) o a una estimulación insuficiente de la hipófisis por la TRH (hipotiroidismo terciario). La prueba de estimulación con TRH permite diferenciar estas afecciones. En el hipotiroidismo secundario, la respuesta de la TSH a la TRH se ve atenuada, mientras que en el hipotiroidismo terciario se obtiene una respuesta normal o retardada.

Además, la aparición de los ensayos inmunoenzimáticos ha proporcionado al laboratorio la sensibilidad suficiente para permitir la diferenciación del hipertiroidismo de la población eutiroidea y ampliar la utilidad de las mediciones de TSH. Este método es un ensayo de segunda generación, que proporciona los medios para la discriminación en el rango hipertiroideo-eutiroideo.

En este método, primero se añade el calibrador de TSH, la muestra del paciente o el control a un pocillo recubierto de anti-TSH. Se añaden los anticuerpos monoclonales marcados con enzima y se mezclan los reactivos. La reacción entre los diversos anticuerpos de TSH y la TSH nativa forma un complejo sándwich que se une al pocillo recubierto de anti-TSH.

Una vez completado el período de incubación requerido, el conjugado enzima-tirotropina unido al anticuerpo se separa del conjugado enzima-tirotropina no unido mediante aspiración o decantación. La actividad de la enzima presente en la superficie del pocillo se cuantifica mediante la reacción con un sustrato adecuado para producir color.

El empleo de varias referencias séricas de niveles conocidos de tirotropina permite la construcción de una curva de respuesta a la dosis de actividad y concentración. En comparación con la curva de respuesta a la dosis, la actividad de una muestra desconocida se puede correlacionar con la concentración de tirotropina.

MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO

• Pipeta con puntas de plástico desechables: 100 μL + 25 μL

• Pipeta multicanal con puntas de plástico desechables: 50 μL, 100 μL (opcional)

• Tapa o cinta de sellado para placa de micropocillos

• Recipientes para reactivos

• Dispositivo de aspiración, Lavador (opcional)

• Fotómetro (lector de placas o tiras), 450 nm

PREPARACIÓN DE REACTIVOS

Buffer de lavado – Concentrado (40x):

Antes de usar diluir a 1000 mL con agua destilada. Conservar a temperatura ambiente.