Reactivo LH

La prueba ELISA de LH

se basa en la unión simultánea de LH humana a dos anticuerpos monoclonales, uno inmovilizado en placas de micropocillos y el otro conjugado con peroxidasa de rábano picante (HPR). Después de la incubación, se realiza la separación de los ligados y los libres mediante un simple lavado en fase sólida, a continuación se añade la solución de sustrato (TMB). Una vez transcurrido el tiempo adecuado para el desarrollo máximo del color, se detiene la reacción enzimática y se determina la absorbancia. La concentración de LH en la muestra se calcula en base a una serie de estándares. La intensidad del color es proporcional a la concentración de LH en la muestra.

La prueba ELISA se realiza como un inmunoensayo indirecto en fase sólida de tipo sándwich. Los micropocillos se recubren con anticuerpo monoclonal anti-LH y luego se bloquean los sitios que no han reaccionado para reducir la unión no específica. Paso 1 Los antígenos LH presentes en los calibradores y las muestras de pacientes se unen al anticuerpo recubierto. Paso 2 El complejo antígeno-anticuerpo reacciona con el conjugado monoclonal anti-LH marcado con enzima (HRP), lo que da como resultado que el antígeno LH quede entre los anticuerpos de fase sólida y el conjugado enzimático. Paso 3 La enzima convierte el sustrato añadido (TMB) para formar una solución coloreada. Paso 4 La intensidad del cambio de color, que es proporcional a la concentración de antígenos presentes en las muestras, se lee mediante un lector de microplacas a 450 nm. Los resultados se expresan en mIU/ml.